Detección de cambios en la glicosilación de la PSA asociados al cáncer de próstata: selección de aptámeros y diseño de aptasensores electroquímicos

Abstract

En la presente Tesis Doctoral se ha diseñado dos metodologías SELEX (Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment) distintas para dirigir la selección de aptámeros hacia el sitio de glicosilación de la PSA. El primer SELEX se basa en la incorporación de etapas de contraselección frente a una forma recombinante de la PSA, que carece de la estructura de glicanos. Así se eliminan de la colección de secuencias de ADN aquellas que se unen a la parte peptídica de la proteína. Tras seis rondas de selección, de las cuales dos fueron contra-selecciones, se identificaron los aptámeros de la última ronda mediante secuenciación masiva y se clasificaron en familias empleando herramientas bioinformáticas. Los aptámeros seleccionados de cada familia se caracterizaron mediante ensayos de unión con detección electroquímica y medidas de SPR para evaluar su afinidad por la PSA y la capacidad de reconocimiento de los glicanos. Uno de los aptámeros seleccionados, el PSA-1, es capaz de reconocer los glicanos pero no tiene selectividad frente a otras glicoproteínas con una estructura de glicanos similar.