Regeneración ósea en ratas atímicas mediante el empleo de células madre mesenquimales adiposas humanas diferenciadas in vitro a osteoblastos sobre scaffolds de suero humano y glutaraldehído

Abstract

Los objetivos eran: aislar y expandir células madre adultas mesenquimales a partir de pequeños fragmentos de tejido adiposo humano, que posteriormente se diferencian a osteoblastos in vitro; obtener tejido osteoide in vitro empleando scaffolds de sueroglutaraldehído con ese tipo de células diferenciadas; establecer la presencia de hueso humano en defectos críticos mandibulares en ratas atímicas, tratados con los constructos de células osteoblásticas obtenidas y sobre los scaffolds indicados; por último, establecer el grado de osificación a las 45 y 90 días del tratamiento de esos defectos críticos. Para ello se aislaron células madre mesenquimales a partir de muestras de tejido adiposo humano, y posteriormente se caracterizaron mediante el empleo de CD34, CD73, CD90, CD105 y CD45 por citometría de flujo. Se diferenciaron in vitro a células osteoblásticas y se comprobó este hecho mediante fosfatasa alcalina y microanálisis de fósforo y calcio. Se realizaron defectos críticos mandibulares en ratas atímicas de forma bilateral; uno de los lados fue el defecto control, y el otro defecto recibió el tratamiento con las células madre mesenquimales diferenciadas a osteoblastos junto con los scaffolds de suero humano y glutaraldehído. Se establecieron dos tipos de grupos de animales: unos con el scaffold exclusivamente, y otros, con los constructos células-scaffolds. En total, resultaron 6 grupos de estudio (grupo con tratamiento con scaffold, otro con tratamiento con scaffold y células, y otro sin tratamiento). Estos grupos se encuadraron en dos períodos de seguimiento distintos, de 45 y 90 días. Tras los citados períodos, se analizó la regeneración de los defectos mediante un estudio de imagen y densitométrico con micro TC. Se completó un estudio histológico, a través de hematoxilina-eosina y von Kossa, e inmunohistoquímico, mediante STRO-1 y vimentina humana. Objetivos alcanzados: 1- Aislar y expandir células madre adultas mesenquimales a partir de pequeños fragmentos de tejido adiposo humano. 2- Diferenciar células madre adultas mesenquimales procedentes de tejido adiposo humano a células osteoblásticas in vitro. 3- Obtener tejido osteoide in vitro empleando scaffolds de suero-glutaraldehído con células osteoblásticas diferenciadas a partir de células madre mesenquimales procedentes de tejido adiposo. 4- Establecer la presencia de hueso humano en los defectos críticos mandibulares de ratas atímicas, tratados con constructos de células osteoblásticas, obtenidas por diferenciación in vitro de células madre adultas mesenquimales procedentes de tejido adiposo sobre scaffolds de suero humano y glutaraldehído.