Análisis molecular de la carboxipeptidasa S de la levadura de fisión Schizosaccharomyces pombe
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Palabra(s) clave:
Química
Bioquímica molecular
Bioquímica
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Resumen:
En la tesis presentada se ha clonado por complementación funcional el gen cps1+,codificador de la carboxipeptidasa S de la levadura de fisión Schizosaccharomyces pombe, secuenciándose toda la pauta abierta de lectura y las regiones 5¿y 3¿flanqueantes. La proteína codificada pertenece a la familia M20 de metalocarboxipeptidasas, habiéndose localizado residuos implicados en la unión del metal y en la actividad catalítica del enzima. Mediante extensión del cebador se identificó el sitio de inicio de la transcripción para el gen cps1+, localizado en la posición -194, a partir del cual sugerimos que la secuencia que actúa como caja TATA en el promotor se sitúa en la posición-367. Se ha estudiado la expresión del gen mediante Análisis Northern realizado en diferentes condiciones nutricionales y ambientales. Se ha comprobado que los niveles del ARN mensajero correspondiente se elevan significativamente en presencia de fuentes de nitrógeno. Este comportamiento es típico de genes sometidos a un sistema genérico de control transcripcional denominado Represión Catabólica por Nitrógeno. Se han identificado y comprobado la funcionalidad, mediante ensayos de retardo en la movilidad electroforética, tres partes de secuencias consenso de unión a factores de transcripción pertenecientes a la familia GATA. Se han identificado varios de estos factores trans implicados en la regulación de la expresión del gen y se han purificado algunos de ellos mediante cromatografía de afinidad, utilizando extractos proteicos obtenidos de células en condiciones desrepresoras.
En la tesis presentada se ha clonado por complementación funcional el gen cps1+,codificador de la carboxipeptidasa S de la levadura de fisión Schizosaccharomyces pombe, secuenciándose toda la pauta abierta de lectura y las regiones 5¿y 3¿flanqueantes. La proteína codificada pertenece a la familia M20 de metalocarboxipeptidasas, habiéndose localizado residuos implicados en la unión del metal y en la actividad catalítica del enzima. Mediante extensión del cebador se identificó el sitio de inicio de la transcripción para el gen cps1+, localizado en la posición -194, a partir del cual sugerimos que la secuencia que actúa como caja TATA en el promotor se sitúa en la posición-367. Se ha estudiado la expresión del gen mediante Análisis Northern realizado en diferentes condiciones nutricionales y ambientales. Se ha comprobado que los niveles del ARN mensajero correspondiente se elevan significativamente en presencia de fuentes de nitrógeno. Este comportamiento es típico de genes sometidos a un sistema genérico de control transcripcional denominado Represión Catabólica por Nitrógeno. Se han identificado y comprobado la funcionalidad, mediante ensayos de retardo en la movilidad electroforética, tres partes de secuencias consenso de unión a factores de transcripción pertenecientes a la familia GATA. Se han identificado varios de estos factores trans implicados en la regulación de la expresión del gen y se han purificado algunos de ellos mediante cromatografía de afinidad, utilizando extractos proteicos obtenidos de células en condiciones desrepresoras.
Notas Locales:
Tesis 2000-058
Colecciones
- Tesis [7455]