Clonación y caracterización del operón de las proteínas ribosómicas L13 y S9 de Streptomyces coelicolor A3 (2)

Abstract

Un análisis mediante electroforesis bidimensional de las proteínas ribosómicas de Streptomyces coelicolor a3(2) reveló que dos proteínas del micelio sustrato no se detectaban en los ribosomas del micelio aéreo. A partir de la secuencia de dos péptidos de una de dichas proteínas (rp3), diseñamos oligonucleótidos degenerados que nos permitieron clonar su gen. La secuencia de ADN muestra dos fases de lectura abierta, rplm y rpsi, cuyos productos deducidos son similares a proteínas ribosómicas L13 y S9, respectivamente, de diversos organismos. El producto de rpsi es la proteína diferencial rp3, pues contiene las secuencias peptídicas de partida. Experimentos de mapeo transcripcional sugieren que rplm y rpsi forman una unidad transcripcional. Ambos genes fueron sobreexpresados en escherichia coli y sus productos purificados. Se emplearon anticuerpos policlonales frente a las proteínas puras para analizar la presencia de ambas en los ribosomas de la bacteria. La concentración de rp3 disminuye progresivamente durante la transición del micelio sustrato al micelio aéreo, siendo aparentemente sustituida por una segunda forma de S9 de menor masa molecular. Experimentos de transcripción-traducción acopladas sugieren que los genes rplm y rpsi están acoplados traduccionalmente.