Origen y mecanismo bioquímico de la resistencia plasmídica a fosfomicina

Abstract

Los objetivos del trabajo se centran en dos apartados: I- la búsqueda y aislamiento en la cepa streptomyces fradiae nrrl-b-3357, productora de fosfomicina de un gen de resistencia a este antibiótico, su clonación y secuenciación para compararlo con el gen fos a encontrado en plasmidos de enterobacterias de origen clínico. Los resultados demuestran que ambos genes son idénticos y refuerzan la hipótesis de que los genes de resistencia a antibióticos proceden de los microorganismos productores. El gen fos a codifica para un polipeptido de 141 residuos con una masa molecular de 15941 daltones. El gen posee un porcentaje citosina + guanina del 62,4%. II- el estudio del mecanismo de inactividad de la fosfomicina, codificado por el gen fos a y las características estructurales y cinéticas de la proteína implicada. Se muestra que la inactivación se debe a la ruptura del grupo epoxido de la fosfomicina y a la unión de un residuo glutationil. La unión se verifica entre el carbono 1 de la molécula de fosfomicina y el grupo sulfhidrilo de la cisteína presente en el tripéptido. Esta reacción está catalizada por el enzima fosfomicin-glutation s-transferasa; después de purificado a homogeneidad se comprobó que este enzima es un homodímero de 32.000 daltones, estabilizado por uniones fuertes de carácter no covalente, y que conserva la metionina inicial. La actividad modificadora se incrementa en presencia de los cationes divalentes mn, fe y co. La temperatura óptima esta entre 20 y 30 grados centígrados y el ph óptimo es de 8,25. Las kms para fosfomicina y glutation son 9,4 y 11 mm respectivamente.