Caracterización de determinantes antigénicos en las proteínas estructurales del virus de la gastroenteritis porcina transmisible producidas en escherichia coli

Abstract

El virus de la gastroenteritis porcina transmisible causa una enfermedad entérica altamente contagiosa que produce la muerte de caso el 100% de los lechones menores de dos semanas de edad. Su genoma es de RNA positivo, poliadenilado e infeccioso. La partícula viral contiene tres proteinas estructurales: una nucleoproteina, asociada con el RNA genómico, una pequeña glicoproteina integral de membranas y una glicoproteina (peplomero) que forma las proyecciones externas características de este virus y que es la responsable de la inducción de inmunidad neutralizante. Se han producido en escherichia coli fragmentos de las tres proteinas estructurales del virus como fusiones con la b-galactosidasa bacteriana. Estos productos de expresión analizados electroforéticamente y transferidos a filtros de nitrocelulosa, se han utilizado para el estudio y caracterización de los determinantes antigénicos de las tres proteinas. De este modo, se han localizado los epitopos de 11 anticuerpos monoclonales en la nucleoproteina viral. De entre ellos, uno ha sido localizado entre los residuos 363 y 373 de la proteina y ha sido utilizado como marcador de otras proteinas contra las cuales no se disponía de un método eficaz y específico de detección. Las fusiones con la proteina intregral de membrana han puesto de manifiesto la gran antigenicidad del extremo carbóxilo de la proteina respecto al amino, ya que todos los sueros policlonales ensayados van dirigidos contra esta zona. También en el extremo carboxilo, entre los restos 216 a 262, se han localizado los epitopos de cuatro anticuerpos monoclonales, revelando la gran dependencia de estructura y/o glicosilacion de sus epitopos, sin embargo, su reacción con un suero policlonal mostró el alto contenido de epitopos de tipo lineal de la región comprendida entre los restos 382 y 1149, respecto a los extremos de la proteina. Este fragmento podría ser usado para el diseño de un método de diagnóstico ...