Desoxirribonucleasas de streptomyces: purificación y caracterización de un enzima con un nuevo tipo de especificidad en streptomyces glaucescens

Abstract

Sstreptamyces glaucescens y otras especies de streptamyces presentan una dnasa periplásmica cuya síntesis está sujeta a control nutricional. Hemos purificado la actividad de s.glaucescens a homogeneidad aparente por cromatografía de fosfocelulosa, seguida de las siguientes cromatográficas: heparina-agarosa, cibarcon blue f3-ga sefarosa, sefadex g-75 y mono q fplc. La enzima presentó un peso molecular aparente de 39600, un pi de 8.15 aproximadamente, un ph óptimo de 7.5 y un requerimiento absoluto pro cationes divalentes en la reacción. Es inhibido por altas concentraciones de sal, hg2+ o iodoacetato, agentes quelantes o residuos fosfóricos, y estimulado por dimetilsufoxido. La nucleasa muestra mayor afinidad por ADN de doble hebra que por ADN de cadena simple, y no hidroliza ARN. Produce asimismo "nicks" en ADN de doble hebra, y degreada y circular, generando extremos terminales 3'-oh y 5'-p. Mediante experimentos de análisis cromatográfico de los extremos de los fragmentos generados y "footprinting" se ha determinado que el enzima reconoce y corta preferentemente en la secuencia dgdg, siendo la primera nucleasa descrita con esta especificidad.