Aptamers as analytical tools in clinical diagnosis: selection, characterization and applications

Abstract

El objetivo de esta tesis doctoral es explorar el uso de aptámeros como herramientas analíticas en diagnóstico clínico, discutiendo su selección, la caracterización de su afinidad de enlace y sus aplicaciones. El trabajo realizado se centra en 2 enfermedades que constituyen importantes problemas de salud en todo el mundo: el cáncer y la COVID-19. Utilizando la metodología SELEX, se seleccionaron aptámeros contra un péptido específico de 16 aminoácidos del colágeno XIα1, un colágeno humano minoritario que se encuentra en la matriz extracelular y que está sobreexpresado en varios carcinomas. Tras realizar un escrutinio bioinformático y una caracterización mediante ensayos de enlace directos con detección electroquímica, el aptámero D1 mostró las mejores características analíticas, con una constante de disociación (KD) de 25 nM. Mediante espectrometría de masas se confirmó que el aptámero D1 captura el colágeno XIα1 en lisados celulares y, además, fue capaz de detectar este colágeno menor en lisados celulares mediante un ensayo sándwich con un anticuerpo como elemento de captura.