Nanopartículas magnéticas como superficie soporte de inmunoensayos electroquímicos

Abstract

Los electrodos serigrafiados marcaron una etapa crucial en la miniaturización de los dispositivos en química analítica. Como consecuencia, a esa reducción de dimensiones acompañó un abaratamiento de los costes, debido a la disminución de la cantidad de reactivos necesarios para cada medida analítica. Para seguir en esta línea de reducción de costes, una de las tendencias actuales es intentar usar el mismo electrodo para varias medidas e incluso de forma continua. Sin embargo el contacto con la muestra conlleva casi siempre una pérdida de señal analítica o en el peor de los casos un envenenamiento del electrodo que hace imposible la reutilización del mismo. Las partículas magnéticas resultaron ser una herramienta muy ventajosa cuando se combinan con electrodos serigrafiados, por varias cualidades como su fácil manejo, o su alta biocompatibilidad. Este material magnético puede ser manipulado, inmovilizado y retirado de la superficie del electrodo serigrafiado con un simple imán y así permitir su reutilización. El objetivo de esta tesis doctoral es desarrollar una metodología que permita la reutilización de los electrodos serigrafiados para la detección de biomarcadores de interés clínico. Para cumplir este objetivo se usarán partículas superparamagnéticas modificadas con estreptavidina. Debido a la gran cantidad de anticuerpos biotinilados, el método que se pretende desarrollar, podría aplicarse a cualquier inmunoensayo. Para llegar a esa meta final, se plantearon una serie de objetivos intermedios como son: - Un Ensayo competitivo para la determinación de biotina. En los inmunoensayos que se pretenden llevar a cabo en esta tesis doctoral, las partes esenciales: son las partículas magnéticas modificadas con estreptavidina, la marca enzimática (Peroxidasa de rabano silvestre) y el co-sustrato (3,3¿,5,5¿-Tetrametilbencidina). Como los anticuerpos que se usan son una variable de cada inmunoensayo, en una primera etapa se decidió, realizar un ensayo competitivo para determinar la biotina. -Una vez optimizada la metodología, se ponen a punto dos sistemas de análisis por inyección en flujo, con el fin de que el operador tenga un papel mínimo en las mediciones de las muestras realizadas y finalmente. -Un Inmunoensayo para la cuantificación de PSA total en suero. Se desarrolló un inmunoensayo tipo sándwich, sustituyendo las placas de un kit ELISA por partículas magnéticas. Se realizaron calibrados con estándares, medidas de PSA en muestras reales y se verificó la reutilización de los electrodos.