Estrategias de identificación de genes de proteasas en una cepa de pseudomonas fluorescens alterante de leche

Abstract

La leche es un alimento muy completo nutricionalmente y por ello fácilmente alterable por microorganismos si no se adoptan unas medidas de higiene adecuadas. El análisis de un lote de leche esterilizada comercial alterada reveló la presencia de una cepa de Pseudomonas fluorescens con actividad proteolítica y lipolítica. El objetivo de este trabajo fue diseñar oligonucleótidos y utilizar la técnica de amplificación por PCR (Polymerase Chain Reaction), seguida de secuenciación o de clonación y secuenciación, para identificar el gen o genes responsables de la actividad proteolítica de esa bacteria. Los oligonucleótidos se diseñaron en base a secuencias de genes de proteasas de Ps. fluorescens descritas en la bibliografía y depositadas en bases de datos, siendo aprX, codificante de una metaloproteasa alcalina, el más común. Utilizando como molde el ADN total de la cepa de Ps. fluorescens aislada de la muestra de leche, se realizaron PCRs variando distintas condiciones para optimizar la reacción. Sin embargo, no fue posible conseguir amplificaciones específicas. Así, la secuenciación de los fragmentos obtenidos, bien directamente o bien después de su clonación, no reveló homología con genes de proteasas. Esto está de acuerdo con la elevada variabilidad de estos genes, y pone de manifiesto la necesidad de estrategias alternativas para la identificación del gen o genes responsables de la actividad proteolítica de Ps. fluorescens implicada en la alteración de leche.