Determinación estructural de los mutantes glu91gln y met44phe de azurina de pseudomonas aeruginosas

Abstract

La azurina es una protéina pequeña que forma parte de la cadena respiratoria de algunas células, función que realiza mediante un ión cobre (II) capaz de almacenar un electrón modificado así su estado de oxidación. Este ión se encuentra próximo a la superficie de la molécula rodeado por una zona que tiene unmarcado carácter hidrofóbico, lo que parece tener relación con la transferencia del electróna otras moléculas de azurina. La determinación de la estructura de azurinas conmutaciones en esa zona permite estudiar la relación entre la estructura y su función. Han sido cristalizados varios mutantes de azurina mediante la técnica de difusión de vapor y la aplicación de siseños factoriales en la búsqueda de las condiciones óptimas de critalización. Adicionalmente, las mismas técnicas han permitido la obtención de cristales de dos formas de creatina quinasa. Se ha determinado la estructura mediante difracción de rayos X de monocristal de dos mutantes de azurina, uno de la zona hidrofóbica (Met44Phe) y otro de sus alrededores (Glu91Gln). Ambas estructuras han sido resueltas utilizando la técnica de reemplazo molecular y refinadas tanto mediante el refinamiento convencional como con temple simulado. La reducción de datos cristalográfica puede ser considerada como un proceso clave enla determinación estructural si se tiene encuenta que los datos generados son utilizados por el resto de las etapas de resolución y refinamiento. El hecho de que durante el experimento se pierda la mitad de la información (en forma de fases de los factores de estructura) aumenta la importancia de la calidad de los datos que puedan ser obtenidos en este proceso (en forma de módulos de los factores de estructura, ya que toda inforamciónposterior sobre las fases se va obtener de las mgnitudes de los mismos.