Clonación, organización genética y expresión de los genes que codifican el sistema de restricción-modificación xmai, isoesquizómero de SalI

Abstract

El sistema RM Xaml de Xc pv. amaranthicola reconoce la secuencia GTCGAC, lo cual le hace isoesquizómero de SalI. Para su clonación se construyó una genoteca de ADN total de esta cepa en el vector de E.coli pBR328. La selección de PU01050 se hizo en base al fenotipo de modificación. Por medio de hibridación y mapeo de restricción se observó que PU01050 además de contener el gen que codifica para la metiltransferasa, contenía un elemento transponible de 1246 Pb que se denominó Is 1389. La secuencia de nt reveló la presencia de cuatro ORFs: dos en el fragmento con actividad modificación en la misma hebra del ADN (ORF1 y ORF2) y dos en la secuencia de inserción en la hebra complementaria (ORFa y ORFb). El análisis de la secuencia de aa, permitió abscibir a ORF1 el gen xamim. La similitud mas elevada encontrada fue entre las metiltransferasas de los sistemas SalI y xami, pudiendo considerar a ambas proteínas como parcialmente relacionadas desde un punto de vista evolutivo. En ORF2 se detectaron dos cortas regiones que presentaban cierta similitud con la endonucleasa SalI, mediante el programa Blast. Por lo que ORF2 podría codificar para la endonucleasa del sistema. El análisis de Is 1389 permitió localizar las repeticiones terminales invertidas, así como el resto de las características de la familia Is 3.