Caracterización genómica y funcional del gen de la anexina A11 de ratón

Abstract

La organización genómica y las características estructurales del gen de la anexina a11 se determinaron mediante la clonación experimental del mismo y su posterior secuenciación. El patrón del procesamiento de intrones se mostró congruente con el de 9 de las 12 anexinas de vertebrados y la determinación del inicio de la transcripción permitió demarcar la región promotora que se sometió al estudio funcional. Estas estructuras se caracterizaron también mediante el análisis genómico comparado del gen en otras especies con el fin de inferir la significancia funcional de las características comunes conservadas. También se identificaron variaciones tales como polimorfismos en un solo nucleótido y procesamientos alternativos conducentes a isoformas de cdnas. La expresión génica de la anexina a11 se evaluó mediante el análisis de bases de datos de secuencias expresadas (ests) y las de "microarrays", mostrándose el amplio rango de expresión de este gen en diversos tipos celulares. La secuencia promotora/reguladora, responsable de la transcripción, se sometió, previamente, al análisis bioinformático con el fin de identificar secuencias posibles de unión a factores de transcripción. La determinación experimental de la actividad transcripcional y los sitios de unión a factores de transcripción se llevó a cabo a través ensayos de transfección celular utilizando diversas regiones del promotor del gen y también se llevaron a cabo ensayos de unión dna-proteína para determinar la especificidad e identidad de las proteínas implicadas. Los resultados obtenidos demuestran la importancia crítica del exón 1 y de los factores sp1 y ap2 en la transcripción de este gen.