Aislamiento y caracterización del gen estructural de la carboxipeptidasa S de Saccharomyces cerevisiae : regulación de su expresión

Abstract

El objeto del trabajo ha consistido en el aislamiento y caracterización del gen de una proteasa vacuolar de S. cerevisiae. Ha sido aislado su gen estructural por complementación funcional. Se ha realizado la caracterización del mismo. Así, se ha localizado en el cromosoma X de la levadura, se ha identificado su ARN mensajero de 2,1 kb y se ha construido un mutante nulo sustituyendo en una cepa salvaje la copia genómica por otra seleccionada. Se ha realizado la secuenciación del gen con un tamaño de 1728 pares de bases y que codifica a una proteína de 576 aminoácidos y 64500 Da. Mediante análisis Western se han detectado 3 bandas de proteína de 76, 74 y 73 kDa. Se ha estudiado la expresión del gen en diferentes situaciones metabólicas. Esta expresión está sometida a represión por nitrógeno y solo se produce la desrepresión en presencia de una fuente de carbono fácilmente fermentable como glucosa o fructosa, elevándose más de 10 veces los niveles de transcripción del gen. Por último, se ha identificado una región del promotor responsable de la represión por nitrógeno entre -644 y -591 pares de bases en relación al ATG iniciador.