Clonación y expresión de genes implicados en la biosíntesis de poliquétidos de Streptomyces halstedii

Abstract

Esta tesis doctoral estudió un fragmento de ADN Pstl de 2,6 kb que hibrida específicamente con ACTI. En primer lugar, se secuenció y caracterizó, revelándose la existencia de dos pautas abiertas de lectura completas (ORFB y ORF1) y otras dos incompletas (ORFA y ORF2). Las ORF1 y ORF2 forman una -cetoacil sintetasa heterodimérica, cuyo centro activo es un residuo de cisteína. Las ORFB y ORFA tienen función desconocida hasta el momento. En segundo lugar, se llevó a cabo la expresión obtenido sólo era detectado mediante el marcaje utilizando S-metionina. Al modificar los tripletes 2 y 6, para adecuarlos a un mejor uso de codones para E. coli se incrementó el nivel de expresión en ambos casos. En tercer lugar, se llevó a cabo un experimento de disrupción génica en otra zona del ADN de S. halstedii, a la izquierda del fragmento estudiado, demostrándose que dicho fragmento también participa en el proceso de biosíntesis del pigmento de la espora de S. halstedii y cuya alteración da lugar a un fenotipo lila.