Caracterización del virus de la enfermedad hemorrágica de los conejos : identificación y expresión del gen de la proteína estructural VP60

Abstract

La enfermedad hemorrágica de los conejos fue descrita por primera vez en china en 1984 como un proceso agudo, letal y caracterizado por un síndrome hemorrágico. Las partículas del agente causal, el virus de la enfermedad hemorrágica de los conejos (RHDV), son icosaédricas, poseen un diámetro de 25 a 30 nm y carecen de envoltura lipídica. Los viriones están formados por copias de una única proteína de 60 kDa (VP60) y contienen un genoma de RNAmc de 7,5 kb y polaridad positiva. La secuencia de los 2483 nucleótidos del extremo 3' mostró que la VP60 del RHDV esta codificada en el extremo 3' de una gran pauta abierta de lectura que se extiende a lo largo de la mayoría del genoma. A pesar de esto, el RHDV produce un RNAm subgenómico de 2,4 kb, encapsidado, coterminal por el extremo 3' con el genoma, y que codifica la VP60. Por tanto, la VP60 viral es producida por procesamiento proteolítico de un precursor o por traducción del RNAm subgenómico. La secuenciación del extremo N-terminal de la VP60 apoya su origen subgenómico. Por otra parte, la VP60 ha sido producida en Escherichia coli como proteína de fusión con la beta-galactosidasa, observando que la proteína quimérica resultante mostraba importantes diferencias antigénicas con la proteína nativa. Sin embargo, la VP60 recombinante obtenida en un sistema basado en la RNA polimerasa de T7 era antigénicamente similar a la VP60 viral como se determinó usando un suero policlonal y anticuerpos monoclonales. Esta VP60 recombinante era capaz de inducir protección contra una dosis letal del virus a los conejos inmunizados con ella. Cuando la VP60 es producida en Saccharomyces cerevisisae bajo el promotor del gen de la fosfoglicerato quinasa se autoensamblaba formando partículas similares morfológicamente a viriones.