Modificación de proteínas por nucleótidos púricos y caracterización de la nucleósido difosfato quinasa de Streptomyces coelicolor

Abstract

Se han identificado varias proteínas que interaccionan con GTP en extractos de Streptomyces coelicolor. Entre ellas, cuatro se corresponden con verdaderas "GTP binding proteins" mientras que se ha detectado una proteína de 43 kDa que sufre un proceso de modificación covalente por guanililación. Este proceso es autocatalítico siendo el resultado de la unión de GMP a partir de GTP y liberándose pirofosfato. La modificación de la proteína es estable a bajas temperaturas, ácido lábil y presenta un punto isoeléctrico de alrededor de 5'5 con varias formas modificadas. Paralelamente se han identificado, al menos, trece proteínas que parecen sufrir procesos de fosforilación a partir de GTP. Por otro lado, se ha purificado y caracterizado la nucleósido difosfato quinasa (NDPK) de S. coelicolor, comprobándose que se trata de una enzima trimérica con subunidades de 16 kDa. Esta enzima cataliza una reacción bisustrato que sigue un mecanismo ping-pong caracterizado por la formación de un complejo intermediario fosforilado en un residuo de histidina. Además, existe una fosforilación en un residuo de serina que representa alrededor del 9% de la fosforilación total. Durante la purificación de la NDPK se ha detectado una asociación entre esta enzima y la succinil coenzima a sintetasa de S. coelicolor.