Mecanismos de acoplamiento estímulo-respuesta a péptidos hipotalámicos en células de hipófisis anterior

Abstract

El objetivo global de esta tesis se ha centrado en el estudio de la respuesta electrofisiológica de las células GH3 a péptidos hipotalámicos utilizando la configuración de "parche perforado" de la técnica de "patch clamp". En concreto, hemos abordado los efectos que la hormona liberadora de tirotropina (TRH), la bombesina y la somatostatina ejercen sobre la actividad eléctrica de estas células. Para ello, hemos realizado estudios tanto de clamp de corriente (viendo las variaciones de potencial a lo largo del tiempo) como de clamp de voltaje (estudiando las diferentes corrientes de estas células de forma aislada). Hemos comprobado que el uso del "parche perforado" mantiene integra la respuesta eléctrica celular a las distintas hormonas, la cual es, al menos en parte, eliminada en condiciones de clamp de célula entera convencional. Una parte prioritaria del trabajo se ha dirigido a la caracterización de los mecanismos que controlan y modulan el desarrollo de la denominada fase II de respuesta a la TRH. Esta fase II se caracteriza por un sostenido y prolongado incremento en la frecuencia de los potenciales de acción tras la adición de la hormona. Hemos comprobado que la TRH inhibe de forma reversible una corriente de Ca2+ y dos corrientes de K+, una dependiente de Ca2+ y otra con características de rectificador anómalo. Asimismo, hemos comprobado la participación de mecanismos de fosforilación y desfosforilación en la modulación de la acción de la hormona sobre la actividad eléctrica y sobre la inhibición de la corriente rectificadora anómala. Estos resultados apoyan la idea de que dicha corriente constituye un componente crucial de regulación de los fenómenos eléctricos (despolarización de la membrana y aumento en la frecuencia de los potenciales de acción), característicos de la fase II de respuesta a la TRH.