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Caracterización de la composición proteica de microvesículas circulantes

dc.contributor.advisorCernuda Morollón, Eva María 
dc.contributor.advisorNavarro Incio, Ana María 
dc.contributor.authorPérez Riesgo, Loreto
dc.contributor.otherDepartamento de Morfología y Biología Celularspa
dc.date.accessioned2019-07-11T07:16:14Z
dc.date.available2019-07-11T07:16:14Z
dc.date.issued2015
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/10651/51619
dc.description.abstractLas microvesículas son pequeñas estructuras liberadas por las células al medio extracelular en respuesta a mediadores inflamatorios, activación celular y apoptosis. Estas vesículas son de gran interés debido a su posible papel como biomarcadores en diversas patologías. Estudios previos demuestran que las MVs se encuentran incrementadas en sangre en pacientes con esclerosis múltiple y que pueden contribuir a la progresión de la enfermedad. Para determinar los posibles mecanismos responsables de dicho efecto es necesario conocer su composición. En base a esto, el objetivo de este trabajo es optimizar un método de aislamiento y realizar la caracterización proteica de las MVs de pacientes con esclerosis múltiple mediante técnicas proteómicas. Se han comparado dos protocolos de aislamiento, la ultracentrifugación y un kit comercial de precipitación de exosomas con el fin de esclarecer cuál resulta más eficaz. Además, se ha llevado a cabo un estudio de la integridad, diámetro y concentración de las vesículas aisladas por ambos métodos mediante microscopía electrónica, DLS y Nanosight. Se ha observado que el kit comercial resulta más eficiente en cuanto al número de vesículas precipitadas por volumen inicial de muestra que el método de ultracentrifugación. El uso de este método implica una precipitación ácida de proteínas previa a la electroforesis, no descrita en el protocolo comercial. Además el proceso de digestión de la proteinasa K resulta insuficiente para eliminar la contaminación de proteínas solubles, a pesar de haber incrementado su tiempo de incubación. En conclusión, para llevar a cabo un estudio proteómico, el método de aislamiento más efectivo en cuanto a pureza de la muestra, sería una ultracentrifugación. Dado que el kit comercial es más eficiente en cuanto a número de vesículas aisladas sería conveniente combinar este método con métodos adicionales de purificación con el fin de obtener una muestra óptima para el estudio proteómico.spa
dc.format.extent33spa
dc.language.isospaspa
dc.publisherLoreto Pérez Riesgospa
dc.rightsCC Reconocimiento - No comercial - Sin obras derivadas 4.0 Internacional
dc.rights.urihttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectProteínasspa
dc.subjectExosomasspa
dc.subjectMicrovesículasspa
dc.subjectProteómicaspa
dc.subjectEsclerosis múltiplespa
dc.subjectMicroscopía electrónicaspa
dc.subjectDLSspa
dc.subjectNanosightspa
dc.subjectUltracentrifugaciónspa
dc.subjectElectroforesisspa
dc.titleCaracterización de la composición proteica de microvesículas circulantesspa
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisspa
dc.type.dcmitextspa


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