Diseño de un sistema rápido de detección de Legionella pneumophila mediante biosensores electroquímicos

Abstract

La Enfermedad del Legionario se considera la forma clínica más severa de las infecciones producidas por Legionella y se ha identificado la especie L. pneumophila como su principal causante. El contacto entre esta bacteria y el ser humano se produce, sobre todo, a través de los sistemas de agua artificiales, por lo que una vigilancia adecuada de estas instalaciones supondría una disminución del número de brotes. Con este fin, existen prácticas estandarizadas y reguladas por la legislación pero que resultan lentas y tediosas. En este trabajo, se plantea el diseño de un biosensor electroquímico para la detección de L. pneumophila como alternativa a las prácticas tradicionales. Empleando como soporte electrodos serigrafiados de oro y como diana un fragmento de 95 mer del gen 16S ADNr de L. pneumophila, se propone un ensayo sándwich en dos etapas. En la primera de ellas, la secuencia escogida como diana hibrida con una sonda indicadora marcada con fluoresceína en uno de sus extremos, formándose un dúplex que posteriormente se une a una sonda de captura en forma de horquilla inmovilizada sobre la superficie del electrodo. La cantidad de analito presente se detecta por medio de un sistema de marcaje enzimático que emplea un anticuerpo anti-fluoresceína conjugado con un enzima peroxidasa (POD). En presencia de la diana, la horquilla se abre y el anticuerpo se une a la etiqueta de fluoresceína, de modo que el enzima puede catalizar la transformación de su sustrato (TMB/H2O2) en un producto que se reduce sobre la superficie electródica dando lugar a una corriente relacionada con la cantidad de nalito presente. Se pudo comprobar que el sensor propuesto presenta un límite de detección de 0,3 nM y una sensibilidad aceptable, teniendo capacidad para distinguir entre distintas especies del género Legionella.