Control de salmonella en alimentos mediante una plataforma sensora basada en su material genético

Abstract

Salmonella es un patógeno alimentario que plantea un importante problema de salud, además de provocar considerables pérdidas económicas en el sector agroalimentario mundialmente. Por ello, su detección rápida y fiable en todas las etapas de la cadena de producción de alimentos es vital para evitar su propagación. Los métodos moleculares basados en la detección de secuencias de ADN específicas de las especies patógenas son una atractiva alternativa a los métodos microbiológicos tradicionales que requieren de 5 a 6 días para obtener el resultado. De entre estas técnicas moleculares, y dada su fácil miniaturización, los genosensores electroquímicos son la opción más adecuada para su comercialización. En este trabajo se propone un método sencillo y sensible para la detección de ADN genómico de Salmonella que combina su amplificación isotérmica por recombinasa-polimerasa (RPA) con detección electroquímica sobre la misma plataforma. Se seleccionó una secuencia de ADN de 86 nucleótidos específica para el gen bipA de Salmonella cuya amplificación se realizó a una temperatura de 37°C, empleando oligonucleótidos cortos que flanquean esta región actuando como cebadores. Uno de ellos, el inverso, se inmoviliza sobre la superficie de oro del electrodo de trabajo a través de un grupo tiol presente en su extremo 5’, incorporando en la disolución el cebador directo modificado con 6-carboxifluoresceína (6FAM). Como resultado se obtienen dúplex de ADN anclados a la superficie metálica cuyo marcaje enzimático se consigue mediante fragmentos Fab dirigidos contra la 6FAM, conjugados con la enzima peroxidasa (POD). Esta enzima cataliza la oxidación de tetrametilbencidina y su forma oxidada se detecta cronoamperométricamente aplicando un potencial de 0 V y midiendo la corriente durante 60 s. La señal analítica registrada permite determinar la presencia de genoma de Salmonella. La plataforma sensora integrada desarrollada permite la detección de 103 unidades genómicas de Salmonella en poco más de una hora.