Marcadores en cáncer: estrategias de análisis de expresión múltiple

Abstract

La RT-qPCR es, actualmente, la técnica de referencia para el análisis de la expresión génica, debido a sus múltiples ventajas como la sensibilidad, la rapidez o el amplio rango de cuantificación. Sin embargo, su elevado coste y la dificultad para realizar reacciones múltiples suponen importantes inconvenientes. Debido a esto, se ha intentado explorar la posibilidad de utilizar PCR múltiple a tiempo final combinada con espectrometría de masas con plasma de acoplamiento inductivo (ICP-MS) y acoplada a electroforesis en gel (GE), en estudios de expresión génica múltiple. Para ello, en este trabajo, se ha llevado a cabo la optimización de las condiciones de RT-PCR para la amplificación múltiple de cuatro genes, tres de ellos relacionados con la respuesta a tratamientos con cisplatino (BAX, CTR1 y ERCC1), y uno, ACTB, como gen de referencia. Una vez conseguido esto, se ha aplicado el análisis de la expresión de dichos genes en las líneas celulares humanas de cáncer de ovario A2780 y A2780cis, sensible y resistente a cisplatino, respectivamente, en células sin tratar y en células tratadas con 40 μM de cisplatino, tanto inmediatamente después del tratamiento como 24 horas después de la finalización del mismo. Los resultados muestran que es posible realizar la separación, detección y cuantificación de los cuatro fragmentos génicos amplificados mediante GE-ICP-MS, y que la relación entre cada uno de los genes analizados y el gen de referencia permite cuantificar las diferencias en la expresión de los tres genes implicados en la respuesta a cisplatino. Aunque se han encontrado algunas discrepancias en los cambios de expresión respecto a la información disponible, y aunque serían necesarias más medidas y mejoras en el método, los resultados obtenidos sugieren que la técnica GE-ICP-MS podría aplicarse satisfactoriamente al estudio de la expresión génica.