Generación de Myxoma virus recombinante defectuoso en el gen M022L mediante recombinación homóloga

Abstract

Myxoma virus (MYXV) es un virus del género Leporipoxvirus, causante de la enfermedad conocida como mixomatosis en el conejo europeo (Oryctolagus cuniculus). La gran tasa de mortalidad causada por dicha enfermedad genera graves problemas tanto a nivel del ecosistema por la ausencia de alimento para otros animales como a nivel económico por las pérdidas sufridas por las granjas de conejos. Debido a fallos de vacunas existentes hay una necesidad de generar nuevas vacunas eficaces. En el presente Trabajo de Fin de Master se trató de generar una cepa de MYXV recombinante mediante la delección de uno de los genes esenciales para la virulencia del virus (M022), que pueda ser utilizada como vacuna en futuros ensayos. Para la obtención de dicha cepa de MYXV recombinante se realizó un experimento de recombinación homóloga entre un plásmido diseñado específicamente para ello y el genoma de MYXV de la cepa Lausanne. El plásmido con el que se realizó la recombinación homóloga porta el gen gfp flanqueado por las regiones genómicas adyacentes al gen M022L en el genoma de MYXV. Dichas secuencias permitirán la sustitución del gen M022L por el gen gfp tras un evento de recombinación homóloga, generando un virus recombinante carente del gen M022L. Mediante dicho procedimiento se ha conseguido la generación de un recombinante de MYXV que expresa gfp y que ha sido purificado hasta en dos rondas de purificación de placas virales.