Participación del enzima mitocondrial SOD2 en los mecanismos de diferenciación de espermatogonias en el testículo

Abstract

La regulación redox por especies reactivas de oxígeno (EROs) tiene un papel fundamental en la señalización celular ya que participa en las decisiones de proliferación y diferenciación celular. La espermatogénesis es un proceso complejo que involucra tanto la auto-renovación de las células madre espermatogónicas como su diferenciación en espermatozoides haploides maduros. La señal de diferenciación de este proceso incluye la modulación de los niveles de EROs. Así, la expresión de enzimas antioxidantes, incluyendo las superóxido dismutasas (SOD), que controlan la producción de H2O2, podría tener un papel fisiológico en espermatogénesis. De forma adicional, se asume que niveles descontrolados de EROs podrían afectar la producción de espermatozoides. Con el fin de estudiar la participación de la SOD2/MnSOD en este proceso, se emplearon ratones WT C57BL6/J, así como ratones SOD2+/- y SOD2+/++. Los ratones se sacrificaron a las 6 semanas, justo antes de alcanzar la madurez sexual, y a las 10 y 24 semanas de edad. Los testículos fueron extraídos y conservados para estudios inmunohistoquímicos y de biología molecular. Las secciones de testículo se tiñeron con DAPI para visualizar la morfología nuclear y se observaron a microscopía confocal para llevar a cabo un recuento de células espermatogénicas. De forma adicional, se extrajo su ARNm y se empleó para llevar a cabo una PCR semicuantitativa para analizar los niveles de expresión de PGP9.5, Sycp3 y Shippo1 como marcadores de espermatogonias, espermatocitos y células haploides, respectivamente. Finalmente también se realizó una PCR cuantitativa y una inmunofluorescencia para el receptor de andrógenos (AR).