Separación y detección de Escherichia Coli por marcaje inmuno-magnético

Abstract

Escherichia coli (E. coli) es una bacteria que puede presentar cepas patógenas y por este motivo es necesaria su detección y cuantificación. Existen varios métodos convencionales para la identificación y detección de estas cepas patógenas, pero en general requieren mucho tiempo, por lo que desarrollar un método de detección más rápido y eficiente que los actuales sería un gran avance. En los últimos años se está haciendo especial hincapié en el desarrollo de biosensores y entre las estrategias para mejorarlos se encuentra la incorporación de nanopartículas (NP) magnéticas. El objetivo de este trabajo fin de máster es el marcaje inmuno-magnético de E. coli con dos tipos de NP superparamagnéticas (FluidMag-Streptavidin y NGap10nm) para su posterior detección y cuantificación. Para llevar a cabo el marcaje es necesario la funcionalización de las NP con un anticuerpo específico contra la membrana bacteriana. Se desarrollan dos protocolos diferentes de funcionalización para cada tipo de NP estableciendo un enlace anticuerpo-NP diferente. Además usando columnas magnéticas se logra separar de una manera eficiente las bacterias marcadas de las que no lo están. La detección y cuantificación de las bacterias marcadas inmuno-magnéticamente se lleva a cabo con un sensor basado en medidas de impedancia que es capaz de detectar la presencia de NP superparamagnéticas en sus proximidades, y además se ha comprobado que la señal del sensor es directamente proporcional a la concentración de NP. La concentración de bacterias que se logra marcar es suficientemente alta para ser detectada con el sensor.