Purificación y caracterización cinética y fisiológica de la aminopeptidasa yspi de schizosaccharomyces pombe

Abstract

El conocimiento del sistema proteolítico de Schiz. Pombe es primordial para la obtención de mutantes en los cuales expresar genes de eucariotas superiores con fines médicos o industriales. Esta tesis consistió en el estudio de la aminopeptidasa yspi de Schiz. Pombe. Para la purificación del enzima se partió de una cepa superproductora del mismo. El enzima se purificó a homogeneidad 1000 veces con respecto a la cepa salvaje, con rendimiento del 5.5%. Este enzima es una proteína dimérica de 184 kda de masa molecular, constituida por dos subunidades idénticas de 92 kda cada una. El enzima presenta una km de 0.13 mm frente a lys-pna. El ph óptimo es de 7.0, siendo estable a valores de ph entre 4.5 y 7.5. Es estable a la temperatura entre 0 grados y 40 grados c. Este enzima es una serin peptidasa y probablemente se trata de una metalopeptidasa. La ausencia de actividad no afecta ni al crecimiento vegetativo ni a la tasa de esporulación. Esta involucrado en la degradación proteica en ayuno de nitrógeno o de carbono, hidrolizando péptidos pequeños producidos por el ataque de endoproteasas sobre polipéptidos.