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Repositorio de la Universidad de Oviedo. > Trabajos académicos > Trabajos Fin de Grado >

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10651/51619

Title: Caracterización de la composición proteica de microvesículas circulantes
Author(s): Pérez Riesgo, Loreto
Advisor: Cernuda Morollón, Eva María
Navarro Incio, Ana María
Other authors: Departamento de Morfología y Biología Celular
Keywords: Proteínas
Exosomas
Microvesículas
Proteómica
Esclerosis múltiple
Microscopía electrónica
DLS
Nanosight
Ultracentrifugación
Electroforesis
Issue date: 2015
Publisher: Loreto Pérez Riesgo
Format extent: 33
Abstract: Las microvesículas son pequeñas estructuras liberadas por las células al medio extracelular en respuesta a mediadores inflamatorios, activación celular y apoptosis. Estas vesículas son de gran interés debido a su posible papel como biomarcadores en diversas patologías. Estudios previos demuestran que las MVs se encuentran incrementadas en sangre en pacientes con esclerosis múltiple y que pueden contribuir a la progresión de la enfermedad. Para determinar los posibles mecanismos responsables de dicho efecto es necesario conocer su composición. En base a esto, el objetivo de este trabajo es optimizar un método de aislamiento y realizar la caracterización proteica de las MVs de pacientes con esclerosis múltiple mediante técnicas proteómicas. Se han comparado dos protocolos de aislamiento, la ultracentrifugación y un kit comercial de precipitación de exosomas con el fin de esclarecer cuál resulta más eficaz. Además, se ha llevado a cabo un estudio de la integridad, diámetro y concentración de las vesículas aisladas por ambos métodos mediante microscopía electrónica, DLS y Nanosight. Se ha observado que el kit comercial resulta más eficiente en cuanto al número de vesículas precipitadas por volumen inicial de muestra que el método de ultracentrifugación. El uso de este método implica una precipitación ácida de proteínas previa a la electroforesis, no descrita en el protocolo comercial. Además el proceso de digestión de la proteinasa K resulta insuficiente para eliminar la contaminación de proteínas solubles, a pesar de haber incrementado su tiempo de incubación. En conclusión, para llevar a cabo un estudio proteómico, el método de aislamiento más efectivo en cuanto a pureza de la muestra, sería una ultracentrifugación. Dado que el kit comercial es más eficiente en cuanto a número de vesículas aisladas sería conveniente combinar este método con métodos adicionales de purificación con el fin de obtener una muestra óptima para el estudio proteómico.
URI: http://hdl.handle.net/10651/51619
Appears in Collections:Trabajos Fin de Grado

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