Cisplatino: aductos inducidos y roturas detectadas en células humanas en cultivo en distintas condiciones de reparación

Abstract

El cisplatino (cDDP) es un fármaco antitumoral ampliamente utilizado en el tratamiento de distintos tipos de tumores, aunque presenta problemas importantes de resistencia. Con el fin de encontrar un método que permitiera predecir la respuesta de los pacientes al tratamiento con este fármaco, en nuestro laboratorio se llevaron a cabo estudios para tratar de relacionar los aductos generados en el ADN por cDDP con sus consecuencias genéticas. Los resultados obtenidos mostraron que existe una clara correlación entre los aductos detectados y sus consecuencias genéticas en Drosophila melanogaster (García Sar et al., 2012). Sin embargo, sorprendentemente, el nivel de aductos detectado en condiciones deficientes para el sistema de reparación por escisión de nucleótido (NER) era menor que el detectado en condiciones eficientes. Además, mientras que en células de mamífero y en ratas in vivo se detectan únicamente bisaductos (enlaces cruzados G-G y G-A), en D. melanogaster se detectaron varios tipos de aductos, incluidos monoaductos. Para comprobar estos resultados en células de mamífero, se emplean dos líneas celulares humanas, una línea de adenocarcinoma de pulmón (A549) y otra de fibroblastos humanos, mutante para el gen XPA (GM04312) y, por tanto, deficiente en el sistema de NER. Ambas líneas celulares se tratan con distintas concentraciones de cDDP durante 3h y se analiza también el efecto de 1 hora de recuperación. Los niveles de aductos inducidos se determinan con la misma técnica que en estudios anteriores (HPLC acoplada a ICP-MS), mientras que sus consecuencias genéticas se cuantifican en términos de inducción de roturas en el ADN mediante el ensayo del Cometa. Los resultados obtenidos, muestran que, aunque no se detecta el amplio espectro de aductos obtenido con D. melanogaster, parece que además de los enlaces cruzados G-G se detecta al menos otro aducto que podría ser el monoaducto de G. En cuanto al ensayo del Cometa, cisplatino induce una respuesta positiva a las 3 h de tratamiento, que es mayor en la línea A549 que en la línea mutante XPA. Por el contrario, después de 1 h de recuperación los niveles de roturas son mayores en la línea mutante XPA que en la A549, lo que evidencia actividad de reparación en esta última línea. Por último, los resultados de este trabajo demuestran que los niveles de aductos inducidos correlacionan significativamente con las roturas de DNA detectadas, incluso considerando las condiciones de recuperación y reparación.