Identificación y caracterización de PS20 de pollo

Abstract

Uno de los principales intereses actualmente en biología del desarrollo es clarificar los procesos que tienen lugar, para que las células inicialmente indiferenciadas se organicen en el espacio y en el tiempo para formar órganos complejos. Nuestro objetivo inicial ha sido identificar nuevos genes implicados en el desarrollo de la extremidad, ya que la extremidad es un modelo clásico muy empleado. En este trabajo hemos clonado a partir de una genoteca de cDNA de pollo, el cDNA correspondiente a ps20 de pollo (cps20). Las proteínas ps20 pertenecen a la superfamilia de proteínas WAP. Esta superfamilia incluye proteínas que tienen al menos un dominio WAP. El dominio WAP es un dominio estructural que presenta poca homología en la secuencia peptídica entre las diferentes proteínas, excepto en 8 residuos de cisteína que están altamente conservados. Entre las 8 cisteínas se forman 4 puentes disulfuro, y son estos 4 puentes disulfuro los responsables del dominio WAP. Aunque no tienen ninguna función asignada, algunos dominios WAP tienen función inhibidora de serinproteasas. El estudio del patrón de expresión de cps20 mostró que se expresa de manera dinámica en la extremidad del embrión pollo, adoptando un patrón posterodistal. Este patrón tan interesante hacía prever una función durante el desarrollo, sin embargo la sobreexpresión de cps20 en el embrión de pollo, mediante la utilización de vectores retrovirales RCAS no dio lugar a ninguna alteración en la formación de la extremidad, obteniéndose extremidades completamente normales. El estudio en células en cultivo dio como resultado una inhibición del crecimiento en células que sobreexpresaban esta proteína. También se estudió para cps20 la función inhibidora de serinproteasas que había sido descrita en otras proteínas WAP. Para ello se utilizó la proteína recombinante cps20his y se estudió la función inhibidora de tripsina.